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教你玩转植物基因敲除

人阅读 发布时间:2019-12-02 16:37

pP1C 系列载体是吉锐生物研发的 CRISPR/Cas9 系统在植物中应用的载体,支持使用农杆菌介导进行的随机整合以及原生质体共转的瞬时表达系统。pP1C 载体系列中使用的 Cas9 基因已对密码子进行优化,其核定位信号已经文献报道能够正常发挥其作用,并在多种植物中得到实践。该 pP1C 系列载体使用整合酶重组片段和载体的方式进行载体构建,整个载体构建仅需 4 天即可完成,缩短了载体构建周期,并简化构建难度。根据您的研究对象,您可以选择适用于单子叶植物的 pP1C.3 载体(OsU3 启动子),或者适用于双子叶植物的 pP1C.4 载体(AtU6 启动子)。
该载体系统能够让您仅靠单个载体就可以轻松地完成基因组 DNA 的编辑,实现精准、低 off-target 的基因编辑体验。

双子叶植物敲除载体示意图

 

实际操作案例

以拟南芥 AtRAN1 基因为例进行 oligo 实操设计

(1)您可以通过以下在线工具设计:

CRISPR Design:http://cbi.hzau.edu.cn/cgi-bin/CRISPR2/CRISPR

(2)选取

atttttcagGCTCTACCTAACCAGCAAACCGTAGATTATCCCAGCTTCAAGCTTGTCATTGTTGGTGATGGAGGCACAGgtacggt

(3)输入序列信息(以拟南 AtRAN1 基因为例),更改启动子为 U6 启动子(单子叶敲除载体更换为 U3 启动子)。 

(4)点 submit,出现下列结果;

 

 (5)根据左边不同 Guide 序列 score 的高低选取合适的 Guide 序列,score 的高低并不代表敲除效率的高低,所以为提高敲除的成功率,一般选择 2-3 个 Guide 序列,构建 2-3 个敲除载体。
部分被引用文献

Targeted mutagenesis in cotton(Gossypium hirsutum L.) using the CRISPR/Cas9 system
文献链接:https://www.nature.com/articles/srep44304
CRISPR/Cas9-mediated efficient targeted mutagenesis in Chardonnay (Vitis vinifera L.)
文献链接:https://www.nature.com/articles/srep32289

产品规格与货号
Cat,No 产品名称 规格 备注

GP0123

pP1C.3

4μg

单子叶单敲载体

GP0122

pP1C.4

4μg

双子叶单敲载体

GP0120

pP1C.7

4μg

单子叶双敲载体

GP0143

pP1C.3 with DNA Recombinase

50 rxns

试剂盒

GP0144

pP1C.4 with DNA Recombinase

50 rxns

试剂盒

GP0119

pP1C.7 with DNA Recombinase

50 rxns

试剂盒

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