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支原体检测二三事

人阅读 发布时间:2021-06-21 10:47

支原体是一类能自我复制的最小的原核生物,可透过一般过滤膜且对抗生素具有一定耐药性,是原代细胞跟传代细胞的常见污染物,其会改变细胞的 DNARNA 及蛋白表达

支原体污染严重危害科研学者们的劳动成果,早发现早处理,把损失降到最低。《药典三部 2015 版》-3301 支原体检验-要求应同时进行培养法和指示细胞培养法(DNA 染色法),也可采用国家检验机构认可得其他办法。这里笔者来简单介绍一下目前实验室常见的支原体检测方法:
1.培养法

培养法是通过将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖,然后再转接种到支原体固体培养基中,培养一段时间后(大约一个月),如果固体培养中出现典型的支原体菌落,则说明待测样品有支原体污染。
 
2、RD-RCA 恒温法(MycoBlue Mycoplasma Detector

吸取 1 ul 细胞培养上清液加入到反应体系中,孵育 1 小时,若细胞培养物被支原体污染,支原体 DNA 保守系列会被等温 DNA 聚合酶特异性扩增,使得反应液由紫色变成天蓝色。肉眼可观察。
 
3.荧光染色法(Mycoplasma Stain Assay Kit

该方法主要是能与 DNA 特异性结合的荧光染料 Hoechst33342 Hoechst33258,可使支原体内 DNA 着色,染色后可用荧光显微镜观察。
 
4.酶活法(TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit
 
支原体溶解时释放出来的酶与 TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit 中提供的底物发生催化反应,将 ADP 转化成 ATP,而 ATP 含量的上升,能通过生物发光化学反应检测,并通过分光光度计进行读数,从而达到检测支原体的目的。
5. PCR 法(Genloci-Mycoplasma Detection Kit
 
利用对支原体基因组中保守的编码域序列进行 PCR 检测的方法来进行支原体检测的。
 
吉锐生物的 Mycoplasma Detection Kit (支原体检测试剂盒)能够快速、准确地检测细胞培养中的支原体污染。试剂盒中的 Primers 是依据支原体基因组中高度保守法人 16SrRNA 编码域而设计的,只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。多年市场验证准确度和灵敏度。
 
除此之外还有相差显微镜法和电镜扫描法,不过,因其限制因素较大,在此不进行说明。

上述内容简单介绍了各种检测方法的原理,下面总结一下优缺点:
 
最后,单独使用目前市场上任何一种支原体检测试剂盒,都无法做到 100% 准确。严格的支原体检测,应至少使用二种及以上检验方法来确定检验准确性。

本文仅笔者个人总结观念,仅供大家参考,欢迎大家讨论。
下期我们将简单介绍支原体清除方法。感谢
的阅读!!!

图片来源:吉锐生物

 

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